免疫親和柱基于抗原抗體反應,特異性抗體連接在柱體內,選擇性吸附樣品中的待檢物,雜質不被吸附,流出柱外,柱上結合的目標物再被特定的洗脫液洗下來,可以用于液相色譜分析或者ELISA含量測定,是一種高效的前處理柱。
免疫親和柱的特點:
1、采用單克隆免疫技術,可以有效性地將待測成分分離出來,分離效率和回收率高,正確性和可靠性強。
2、實驗穩定性好,重復性強。
3、純化過程簡單快速,短時間即可處理大量樣品。
4、實驗設備輕便,自動化程度高,操作簡單,對實驗人員要求不高,可在小型試驗場所使用。
5、無需有毒溶劑,實驗過程安全可靠。
6、應用范圍廣,可處理多種復雜樣品。
免疫親和柱的條件優化要怎么做:
選擇小柱:根據基質樣品和目標物選擇合適的SP小柱。
活化平衡:活化溶液可以濕潤填料,滲透鍵合相,消除填料雜質,通常和洗脫液一致平衡溶液一般和上樣液接近,從活化溶液過度到上樣液,減少上樣回收率損失。
上樣:將提取溶液加入到小柱上,一般需控制流速在1-2滴/秒。
淋洗:使用與上樣溶液相同或接近性質的溶液沖洗不需要的雜質。
洗脫:合適的洗脫溶劑將目標物洗脫下來。
小貼士:
真菌毒素危害極大,應戴手套操作。
不要使用過了有效日期的。
洗脫液可以直接使用色譜級甲醇洗脫,但可能會降低回收率。
多毒素檢測中,嘔吐毒素因為是水溶性,過柱操作時對有機溶劑耐受性低,所以組合中包含有嘔吐毒素的前處理方法會相應復雜一些,前處理方法基本一致。